INTRODUÇÃO: Uma das principais consequências da hipóxia tumoral é a diminuição da eficiência dos tratamentos radioterápicos e quimioterápicos. Deste modo, a identificação de tumores com hipóxia é de elevada relevância. Na década de 80, foram desenvolvidos alguns radiofármacos de tecnécio-99m, baseados em ligantes aminooxima funcionalizados com nitroimidazóis, permitindo a avaliação da hipóxia tumoral por método não invasivo. Recentemente foi comprovada, que a presença de grupos nitroimidazóis, pode ser dispensada, em alguns casos, bastando apenas à estrutura do complexo de tecnécio-99m com o ligante aminooxima.

OBJETIVO: Sintetizar o ligante HL91, preparar o complexo com HL91-99mTc e testar sua estabilidade in vitro.

MATERIAIS E MÉTODOS: A preparação do ligante HL91 foi realizada em 3 etapas: 1) desidratação do álcool 2-metil-butano-2-ol, com solução de H2SO4; 2) preparo do NOCl e reação deste com o 2-metil- 2-buteno, gerando o 2-cloro-2-metil-3-nitrosobutano; 3) Reação do composto anterior com 1,4-dimetilbutano gerando o HL91. Cada molécula foi caracterizada por pontos de ebulição e fusão e por 1H-RMN (200 MHz). O complexo HL91-99mTc, foi preparado pela redução do Na99mTcO4 (555 MBq) com Sn2+ na presença do ligante, e a pureza radioquímica foi determinada por cromatografia nos sistemas Whatman4/H2O e TLC-SG/NaCl 0,9%) e por HPLC, utilizando coluna C18 4μ Hydro RP 80A, em MeOH:H2O (6:4). Foram realizados estudos de estabilidade frente à cisteína e histidina por eletroforese, onde 900μL de solução 0,001M de cada aminoácido foram incubados com 100μL do complexo marcado em banho-maria a 37ºC por 1h; foi utilizado papel Whatman 3MM como suporte em tampão Tris (pH=8,6), em corrente contínua de 275V, por 2 horas. Também foi realizado o estudo de ligação a proteínas plasmáticas, ao adicionar cerca de 50μL do complexo marcado a 1mL de solução de soro albumina humano (SAH) 0,2% ou 1mL de plasma. Após período de incubação à 37ºC (5, 45, 120, 240min) uma alíquota de 100μL foi retirada em cada tempo (em duplicata) e misturada a 200μL de etanol em um microtubo e centrifugada a 5000rpm por 15min; o sobrenadante e precipitado foram separados e mensurados em contador de radiação gama.

RESULTADOS: Na etapa final da síntese do ligante obtivemos 80,3% de rendimento. A eficiência de marcação do complexo foi de 97% e o complexo apresentou carga neutra. No estudo de estabilidade frente aos aminoácidos, o complexo mostrou-se estável pelo tempo de estudo, mantendo a pureza radioquímica de 95%. No estudo de ligação às proteínas plasmáticas, a proporção de atividade no plasma é de 49,1%, superior ao encontrado quando incubamos somente com SAH (31%), nos mesmos tempos.

CONCLUSÕES: O complexo obtido e sua respectiva estabilidade in vitro apresentam as características desejadas para estudos posteriores em modelos celulares e animais para determinação de regiões de hipóxia tumoral.